Reactivo liofilizado de endotoxina refinada a partir de E. coli, usado para validar y controlar pruebas LAL.
El Estándar de Control de Endotoxinas (CSE) es un producto liofilizado compuesto por 500 ng de endotoxinas purificadas a partir de la cepa E. coli UKT-B, que actúa como un patrón preciso y confiable para pruebas de endotoxinas. Este material es esencial para la preparación de controles y curvas estándar, asegurando reproducibilidad y cumplimiento con los requerimientos de validación.
El volumen de reconstitución de las CSE depende del lote de reactivo con el que se empleará en los ensayos (series PYROSTAR™ ES-F o Limulus Color KY). El Certificado de Análisis (COA) asociado al lote de reactivo proporciona las instrucciones específicas para el lote correspondiente.
En los ensayos con la serie Limulus Color KY, la potencia (UE/vial) se indica en la etiqueta del vial. Para obtener una concentración de 1.000 UE/mL, divida la potencia indicada entre 1.000 para calcular el volumen de LRW necesario para la reconstitución.
La preparación para Gel-Clot se basa en una serie de diluciones dobles de las CSE, generando una curva estándar con concentraciones de 2λ, λ, λ/2 y λ/4, en función de la sensibilidad del reactivo.
Ejemplo: Reactivo PYROSTAR™ ES-F multi-ensayo (λ = 0,015 UE/mL).
| Endotoxinas iniciales (UE/mL) | Volumen LRW añadido (mL) | Volumen endotoxinas añadidas (mL) | Endotoxinas finales (UE/mL) |
|---|---|---|---|
| 1000 | 3,6 | 0,4 | 100 |
| 100 | 3,6 | 0,4 | 10 |
| 10 | 3,6 | 0,4 | 1 |
| 1 | 2,0 | 2,0 | 0,5 |
| 0,5 | 2,0 | 2,0 | 0,25 |
| 0,25 | 2,0 | 2,0 | 0,125 |
| 0,125 | 2,0 | 2,0 | 0,06 |
| 0,06 | 2,0 | 2,0 | 0,03 |
| 0,03 | 2,0 | 2,0 | 0,015 |
| 0,015 | 2,0 | 2,0 | 0,0078 |
| 0,0078 | 2,0 | 2,0 | 0,0039 |
Para ensayos cinéticos, la serie de dilución suele ser de diez veces, generando al menos tres estándares dentro del rango de análisis del reactivo.
Ejemplo: Reactivo PYROSTAR™ ES-F multi-ensayo (λ = 0,015 UE/mL, rango KTA: 0,001 – 10 UE/mL).
| Endotoxinas iniciales (UE/mL) | Volumen LRW añadido (mL) | Volumen endotoxinas añadidas (mL) | Endotoxinas finales (UE/mL) |
|---|---|---|---|
| 1000 | 3,6 | 0,4 | 100 |
| 100 | 3,6 | 0,4 | 10 |
| 10 | 3,6 | 0,4 | 1 |
| 1 | 3,6 | 0,4 | 0,1 |
| 0,1 | 3,6 | 0,4 | 0,01 |
| 0,01 | 3,6 | 0,4 | 0,001 |
Nota: Los volúmenes de LRW y endotoxinas pueden ajustarse manteniendo siempre las proporciones establecidas.
